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饲料淀粉糊化度测定

作者:admin 时间:2019-05-11 22:54
试剂:
  1. 联甲苯胺(o-Toluidine)试剂:溶解1.5g硫脲于940ml冰醋酸,家60ml甲苯胺,存于有色玻璃瓶中。
  2. 乙酸钠缓冲液:溶解4.1g无水乙酸钠与1L蒸馏水,用乙酸调pH至4.5。
  3. 葡萄糖淀粉酶溶液:将2g根霉葡萄糖淀粉酶分散于250ml乙酸缓冲液,用玻璃棉滤纸(Whaatman No.GF/A)迅速过滤,限2小时内使用。葡萄糖淀粉的特异活性是在pH4.5,温度40℃下生成28.4umol葡萄糖/min/mg蛋白。
  操作规程:
  1. 制备淀粉部分糊化的样品。将20mg样品分散于50ml离心管中的5ml蒸馏水中。
  2. 制备淀粉完全糊化的样品。将20mg样品分散于50ml离心管中的3ml蒸馏水和1ml 1N NaOH中。5分钟后加1ml 1N HCl。
  3. 葡萄糖淀粉酶水解和测定葡萄糖。每个离心管加250ml葡萄糖淀粉酶溶液,40℃保温30min。加2ml 25%的三氯乙酸钝化葡萄糖淀粉酶(并使该酶和其他蛋白沉淀),以16,000×g离心5min。
  4. 取0.5ml上清液于试管中,加入4.5ml联甲苯胺(o-Toluidine)试剂,将试管置沸水中10min,用冷水冷却,加5ml冰醋酸,测定在63.nm的吸收率。
  按下式计算淀粉糊化度:
  Y=100*(B-K)/ (A-K)
  K=A*(C-B) / (A-2B+C)
  其中,A=全糊化淀粉的吸收率;
  B= 全糊化淀粉和经过30min的酶水解的完全淀粉混合物的吸收率;
  C= 部分糊化淀粉和经过60 min的酶水解的完全淀粉混合物的吸收率;
  K= 1%完整淀粉经过30min水解后的吸收率。这对每种淀粉或特定处理的淀粉是一个常数,常规分析中只需测=定一次。
  这规程也可用来计算总淀粉%;用葡萄糖溶液(720ug/ml)制定标准曲线。按前法第
  2步和第3步骤处理样品,根据标准曲线读取葡萄糖浓度。按下式计算淀粉含量:
  淀粉总量%=葡萄糖*0.9*100/样品重(干基)
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